换一批RT-RAA联合CRISPR/Cas12a快速检测新型冠状病毒方法的建立与评价
Establishment and evaluation of RT-RAA combined with CRISPR/Cas12a for rapid detection of SARS-CoV-2
摘要目的 建立一种基于反转录酶-重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)联合簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)/Cas12a系统的快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的方法,并对其进行评价.方法 根据NCBI数据库中SARS-CoV-2的核衣壳(N)基因设计RT-RAA引物和CRISPR来源RNA(crRNA),优化检测体系中乙酸镁(MgAc)用量、RT-RAA反应温度和时间以及LbCas12a反应温度.以100～106 copies/μL重组质粒和其他呼吸道病原体分别评估该方法灵敏度和特异性.采用RT-RAA-CRISPR/Cas12a法和RT-PCR法对70份临床标本进行平行检测,比较两种方法的符合率.结果 优化后的RT-RAA-CRISPR/Cas12a检测方法可在37 ℃条件下50 min内完成SARS-CoV-2检测.荧光法检测灵敏度为10 copies/μL,侧流层析法为1 × 102 copies/μL.该方法能特异检测SARS-CoV-2,与其他呼吸道病原体无交叉反应.RT-RAA-CRISPR/Cas12a法检测70份临床标本的 结果与RT-PCR法完全一致,符合率为100％.结论 建立的RT-RAA-CRISPR/Cas12a法检测SARS-CoV-2快速、经济、灵敏度高、特异性强,无需昂贵仪器设备,可由经验不足的人员操作,为临床快速诊断和现场大规模筛查SARS-CoV-2提供了新的思路和方法.
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关键词
新型冠状病毒重组酶介导等温扩增CRISPR/Cas12a侧流层析快速检测SARS-CoV-2reverse transcriptase-recombinase aided amplificationCRISPR/Cas12alateral flow assayrapid detection
栏目名称
DOI
10.13602/j.cnki.jcls.2024.04.02
发布时间
2024-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
惠州市科技研发计划社会发展领域研发项目（210426104574869）
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