摘要[目的] 化学物诱发的细胞转化和基因突变分别反映不同的遗传终点.通常的做法是在各自独立的试验中分别进行.本方法介绍了将这两个观察终点结合在同一试验中同步进行的技术,以便对其结果进行分析比较,为探明化学物遗传毒性的特征,以及可能的分子致癌机制提供资料与线索.[方法] 使用培养的人成纤维细胞或其他永生化细胞系.使用永生化细胞则便于进一步的成瘤性恶性转化鉴定和突变体的克隆定性.人成纤维细胞维持在补充10%小牛血清、抗生素和氢化考的松的Eagles ASP培养液中.细胞自液氮中取出,尽快消融复苏,增殖为足够的指数生长期细胞群.再按1×104细胞/cm2的密度接种,18 h后换以无血清培养液进行化学物处理,持续时间1 h.处理后每个浓度至少保证有1×106个存活细胞.经8～10 d突变表达期培养,细胞达80%汇合时,收获合并每剂量组所有细胞,同时建立hprt基因突变和转化灶形成试验.其受试细胞总数均为1×106.诱变试验细胞接种密度为450细胞/cm2,培养液含选择剂6-硫代鸟嘌呤,浓度为40 μmol/L.培养2周,中间换液1次.结晶紫染色后计数抗性突变细胞集落数.转化灶试验接种密度为900细胞/cm2,培养液中小牛血清含量为5%.培养6～7周,每周换液1次.亚甲蓝染色后计数转化灶.[结果] 使用不同的化合物,包括乙基亚硝基脲,乙酰氨基芴、苯并(a)芘和氮芥吖啶(ICR-191),对该联合试验方法进行验证,结果表明抗6-硫代鸟嘌呤细胞突变体形成率与转化灶形成率各自都显示很好的剂量-反应关系,而且两个观察终点的剂量-反应曲线斜率也大体一致.[结论] 本联合试验所设计的操作方法,能得到给以完全一致的实验处理,并经过相同突变表达期的同一细胞群.对此细胞群进行的联合试验,所获得细胞转化灶形成频率和突变频率的结果,具有良好的可比性.同时分离的转化灶细胞和突变体细胞更适合作为成瘤性试验,以及突变特异性分子生物学研究的材料,便于做进一步深入的比较分析.