换一批
换一批HGF非融合蛋白真核表达载体的构建及其在骨骼肌细胞中的表达
Construction of HGF Gene Non-fusion Expression Vector and Expression of HGF Protein in Skeletal Muscle Cells
摘要目的 构建以HGF为目的基因、以EGFP为报告基因的非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,并观察HGF基因在原代培养的大鼠骨骼肌细胞中的表达.方法 利用BamH I单酶切质粒pcDNA3-HGF,得到HGF基因片段,将其正向插入到真核表达载体pCMV-IRES-EGFP的CMV后方BamH I的单克隆位点.脂质体介导转染至原代培养的大鼠骨骼肌细胞,在荧光显微镜下观察EGFP的表达,并用ELISA法检测HGF的表达情况.结果 构建了HGF的非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,转染原代培养的大鼠骨骼肌细胞24～72 h 后,见30%的细胞表达EGFP.ELISA检测细胞培养液证实转染后第1天即有HGF的表达,第4天HGF浓度为(5 402.0±227.9 )ng/L.结论 成功构建了非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,其在原代培养的大鼠骨骼肌细胞中能有效表达.
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主题词
肌纤维, 骨骼(Muscle Fibers, Skeletal)蛋白(Egg White)转染(Transfection)细胞(Cells)肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor)
分类号
R3
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1671-3826.2007.01.002
发布时间
2007-03-27
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