换一批
换一批摘要目的 重组表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)及其连接形成的二联体PO-E2融合蛋白,已用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断.方法 针对PDC-E2,OGDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-OGDC-E2,pET28a(+)-P0-E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质.表达蛋白经SDS-PAGE,Western-blot等鉴定. 结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒.IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白.经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性.结论 重组表达的PO-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化的实验室诊断.
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