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祛风养心方通过SIRT3-AMPK介导自噬抑制Ang Ⅱ诱导H9c2心肌细胞肥大机制研究

Research on the Mechanism of the Qufeng Yangxin Decoction(祛风养心方)Inhibitting Ang Ⅱ-Induced Hypertrophy of H9c2 Cardiomyocytes by Regulating Autophagy Based on SIRT3-AMPK Signaling Pathway

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摘要目的探究祛风养心方通过SIRT3-AMPK通路介导自噬抑制AngⅡ诱导H9c2心肌细胞肥大的作用机制.方法用慢病毒感染H9c2心肌细胞构建SIRT3低表达稳定株.用Ang Ⅱ诱导H9c2心肌细胞肥大模型,制备含药血清.实验组分为4组:①10％空白血清(blank)+Lv-NC;②Ang Ⅱ+10％空白血清(blank)+Lv-NC;③AngⅡ+10％QFYX含药血清+Lv-NC;④Ang Ⅱ+10％QFYX含药血清+Lv-shSIRT3.用鬼笔环肽染色评价细胞面积,Western Blot 方法检测 ANP、BNP、ACT α 1、LC3-Ⅱ、Beclin1、P62、P-AMPK、P-mTOR 蛋白的表达含量.结果与blank+Lv-NC组比较,Ang Ⅱ+Lv-NC组H9c2心肌细胞肥大,心肌肥厚基因蛋白的表达上调[ANP、BNP(P＜0.01),ACT α1(P＜0.05)],自噬代表基因 Beclin1、LC3-Ⅱ、P62 的表达显著上升(P＜0.01),SIRT3 的表达下降(P＜0.05),P-AMPK下降(P＜0.01),P-mTOR上升(P＜0.01).与 AngⅡ+Lv-NC组比较,Ang Ⅱ+QFYX+Lv-NC组心肌肥大不显著,肥厚基因ANP、BNP、ACT α 1、自噬代表基因Beclin1、LC3-Ⅱ、P62的表达显著下降[ANP、BNP、ACT α1、Beclin1(P＜0.01),LC3-Ⅱ、P62(P＜0.05)],SIRT3 的表达上升(P＜0.01),P-AMPK 上升(P＜0.01),P-mTOR下降(P＜0.01),与 AngⅡ+QFYX+Lv-NC组比较,Ang Ⅱ+QFYX+Lv-shSIRT3组肥厚基因表达增强[ANP、BNP(P＜0.01),ACTα1(P＜0.05)],SIRT3处于低表达水平(P＜0.01),自噬代表基因的表达升高[Beclin1、P62(P＜0.01),LC3-Ⅱ(P＜0.05)],P-AMPK下降(P＜0.01),P-mTOR上升(P＜0.01).结论祛风养心方可以通过改善自噬,通畅自噬流,抑制AngⅡ诱导H9c2心肌细胞肥大,这种保护作用是通过促进SIRT3的表达介导AMPK-mTOR通路实现的.