换一批TDG变体的构建、表达、纯化及其DNA修复功能研究
Construction, expression, purification and DNA repair ability of TDG mutant
摘要目的:研究DNA错配修复蛋白 mTDG截短变体修复G:U错配的生物活性.方法:通过PCR扩增得到mTDG的C-端截短变体mTDG(1-279)基因片段,用Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并回收,然后插入双酶切过的原核表达载体pET28a(+),得到pET28a-mTDG(1-279)重组质粒.将重组质粒转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达,过Ni+柱纯化得到His- mTDG(1-279)融合蛋白.最后通过TDG体外测活试验,测试mTDG(1-279)蛋白对G:U错配的修复活性.结果:mTDG(1-279)蛋白获得了表达和分离纯化,且体外测活实验表明mTDG(1-279)蛋白具有良好的G:U错配修复活性.结论:mTDG(1-279)蛋白依然具有修复G:U错配的生物活性,为进一步研究其活性结构域等结构与功能关系奠定了基础.
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DOI
10.3969/j.issn.1671-6264.2012.04.001
发布时间
2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金资助项目（(31071196,81072712,50973046)）
江苏省自然科学基金资助项目（(BK2010046,BZ2010074,BK2011573,BZ2011048,BK2011228)）
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