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碱性品红染色活体细菌方法的建立

摘要目的:建立活体细菌着色观察的实验方法.方法:将金黄色葡萄球菌,黄色微球菌,大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的18h固体培养物洗脱,并离心洗涤后,NS稀释浓度为5×107菌落形成单位/毫升 (Colony forming unit,CFU/mL),分实验与对照组各4珠菌. 实验组细菌经不同浓度与作用时间的碱性品红(Basic fuchsin,BF)着色洗涤后,保存于甘油磷酸缓冲液.镜下观察细菌动力,同时采用平皿倾注法测取两组细菌CFU/mL,观测染液浓度、作用时间及甘油缓冲液配制对细菌存活率的影响.结果:与对照组相比,0.5%BF染色时,细菌CFU无显著性差别(P>0.05),染料大于此浓度染色时,CFU有差别性(P<0.05),染色时间10min内CFU无显著性差别(P>0.05).30%甘油磷酸盐缓冲液保藏着色活体细菌,在60h内无显著性差别(P>0.05),72h后有差别性(P<0.05).结论:0.5%BF染色细菌并保藏于30%甘油磷酸盐缓冲液中,细菌动力与存活率在一定时间内较稳定,适用于活体细菌显色法的形态学检测.

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