换一批低氧环境下槲皮素作用于肝癌细胞的核心靶点蛋白及通路分析
Core Target Proteins and Pathway Analysis of Quercetin in Hepatocellular Carcinoma Cells Under Hypoxia
摘要目的 明确槲皮素在低氧环境下对肝癌细胞生物学效应,并通过网络药理学分析筛选其核心作用靶点和对应的的信号通路.方法 采用体外细胞增殖实验(CCK-8)法检测槲皮素在低氧条件下对肝癌细胞增殖的影响.利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和GeneCards数据库分别获取槲皮素作用的靶点和肝细胞癌的低氧相关基因.筛选槲皮素靶向的肝癌细胞低氧相关基因并导入STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用网络,利用Cytoscape 3.9.1对网络节点进行筛选分析,将筛选后的目的基因与槲皮素在AutoDock Vina软件中进行对接,体外检测相关基因蛋白表达.结果 体外细胞增殖实验(CCK-8)结果表明,低氧环境下,不同浓度的槲皮素作用48 h和72h,LM3肝癌细胞都会受到抑制槲皮素与疾病共同靶点77个,蛋白网络筛选关键蛋白结果为蛋白激酶B-Alpha(Akt1).槲皮素与Akt1分子对接结果为-7.6 kcal/mol,展现出较好对接活性.荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检验结果表明槲皮素浓度为100 μmol/L和200 μmol/L条件下Akt1的DNA表达量下降明显;蛋白免疫印迹实验(Western Blot)结果表明槲皮素浓度100 μmol/L、200 μmol/L时Akt1蛋白表达量明显下降.结论 低氧环境下肝癌细胞可能以Akt1作为上调蛋白中的核心蛋白,槲皮素能够降低Akt1的含量来阻断PI3K/Akt通路来抑制低氧信号通路,从而实现抑制肝癌细胞的作用.
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