换一批Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建
Construction of breast cancer MDA-MB-231 cell line transfected by Cbl-b shRNA
摘要目的 构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA(shRNA)真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础.方法 设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析.化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞.将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒.脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现MDA-MB-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调.结论 成功构建了基因沉默Cbl-b的MDA-MB-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础.
更多相关知识
分类号
R737.9（泌尿生殖器肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1002-266X.2011.52.016
发布时间
2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30700807）
辽宁省教育厅重点实验室项目（2008S246）
- 浏览180
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
