迷迭香酸调控TGF-β1/SMAD3通路对视网膜母细胞瘤增殖、侵袭影响的实验研究
Experimental Study of Effects of Rosmarinic Acid on the Proliferation and Invasion of Retinoblastoma by Regulating TGF-β1/SMAD3 Pathway
摘要目的 以人视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)细胞系Y79细胞为研究对象,探究迷迭香酸(Ros-marinic acid,RA)对Y79细胞增殖、侵袭的影响,以及其是否与转化生长因子β1(Transforming growth factor β1,TGF-β1)/果蝇 MAD 基因 3 哺乳动物类似基因(Drosophila mad gene 3 mammalian like gene,SMAD3)通路的表达有关.方法 采用含10%胎牛血清RPMI-1640培养基对Y79细胞进行培养并分组:对照组(未经任何处理)、RA低(25 μmol/L RA)、中(50 μmol/L RA)、高(100 μmol/L RA)剂量组、RA+TGF-β 受体 ALK5 抑制剂(SB431542)组(10 μmol/L SB431542预处理+100 μmol/L RA).采用MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测TGF-β1 mRNA、SMAD3 mRNA表达,Western Blot法检测TGF-β1、SMAD3、p-SMAD3、MMP-2、MMP-9蛋白表达.结果 与对照组比较,RA低、中、高剂量组Y79细胞存活率、侵袭能力以及 TGF-β1、SMAD3、p-SMAD3、MMP-2、MMP-9 蛋白表达、TGF-β1 mRNA、SMAD3 mRNA 表达均显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且RA各剂量组间具有剂量依赖性(P<0.05);与RA高剂量组比较,RA+SB431542 组 Y79 细胞存活率、侵袭能力以及 TGF-β1、SMAD3、p-SMAD3、MMP-2、MMP-9 蛋白表达、TGF-β1 mRNA、SMAD3 mRNA表达均显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05).结论 RA能够有效降低Y79细胞侵袭与增殖能力,并诱导细胞凋亡,可能与抑制TGF-β1/SMAD3通路相关.
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