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Fast COLD-PCR/Sanger测序法对乙型肝炎患者不同耐药基因突变类型检测的应用研究

Fast COLD-PCR/and Sanger Sequencing Methods for Detection of Mutations in Different Resistance Genes of Hepatitis B Patients

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摘要(1)Fast COLD-PCR/Sanger测序法对不同突变类型的检测浓度有所不同,对突变株DNA的最低检出限可从5.0 E+01 IU/mL-1.0 E+03 IU/mL不等;Full COLD-PCR/Sanger测序法对单一突变类型的检测浓度大致相同,突变DNA浓度约≥5.0 E+02 IU/mL时即可检出,对混合突变类型时最低检出限可提高至1.0 E+02 IU/mL.(2)常规PCR/Sanger测序对所有类型突变株的检出灵敏度均为10％(突变型:野生型比例为1:10,下同).对于单一位点的突变类型,当发生熔解温度(melting temperature,Tm)下降的突变(如C:G→T:A等)时,Fast COLD-PCR对突变株的检出灵敏度达1％,Full COLD-PCR则为2％;对Tm不变或升高的突变(如C:G→G:C或T:A→C:G等),仅有Full COLD-PCR可提高对突变株的灵敏度为2％.对于多位点突变类型,Fast COLD-PCR与Full COLD-PCR法检出突变的灵敏度可进一步提高为0.5％和1％.