双重数字聚合酶链式反应定量检测转基因马铃薯EH92-527-1品系
Quantitative detection of genetically modified potato event EH92-527-1 by duplex digital polymerase chain reaction
摘要目的 建立双重数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)精准定量检测转基因马铃薯EH92-527-1 品系的方法.方法 基于马铃薯内参UGPase基因和EH92-527-1 品系外源插入片段旁侧序列,设计合成引物和探针,确定反应体系和反应条件,建立转基因马铃薯EH92-527-1品系双重数字PCR定量检测方法.对方法的特异性、定量检测范围、定量限、检测准确度进行评估.结果 该方法特异性良好,除转基因马铃薯 EH92-527-1 品系外,其他物种和品系均无扩增;在线性范围内,内参基因和品系特异性基因拷贝数的相对标准偏差值介于 0.86%~22.90%,线性决定系数r2>0.99;品系特异性基因的定量限为 3 拷贝;不同浓度样品EH92-527-1 品系含量测定值与真实值之间的偏差分别为 1.54、4.92 和-1.31.结论 方法具有良好的重复性和准确度,可以用于进出口产品中转基因马铃薯EH92-527-1 成分的定性定量检测.该方法的建立对于转基因马铃薯及其制品的监控监管、安全评价和风险预警具有重要意义.
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