‘巨峰’葡萄皮花色苷的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性

Isolation, Purification, Structure Identification and Anti-tumor Activity of Anthocyanin from Kyoho Grape Skins

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摘要为研究‘巨峰’葡萄皮花色苷分离纯化方法、结构鉴定及抗肿瘤活性,将葡萄皮色素的粗提物依次经过AB-8大孔树脂、聚酰胺树脂、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶进行分离纯化;利用超高效液相色谱三重四极杆飞行时间质谱联用技术对分离所得的花色苷进行结构鉴定;通过噻唑蓝法、Transwell侵袭实验及Annexin V-FITC/PI双标记染色法分别研究纯化后所得的花色苷组分对HepG2肝癌细胞和A549肺癌细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响.结果表明:紫外-可见光谱扫描发现经AB-8大孔树脂纯化后所得的样品溶液(样品1)在280、520、330nm波长处均有吸收峰,说明样品1中主要成分为花色苷类,同时可能含有酰化基团;样品1再经聚酰胺树脂纯化后发现聚酰胺树脂对花色苷产生吸附作用,而经Sephadex LH-20凝胶纯化后花色苷得到较好的分离,最终得到3种花色苷组分(色素Ⅰ、色素Ⅲ和色素Ⅳ),分别为矢车菊-3-芸香糖苷、锦葵素-3,5-双葡萄糖苷-香豆酰和锦葵-3-半乳糖苷,它们所对应的得率和纯度分别为(0.108±0.011)％、(0.053±0.007)％、(0.038±0.005)％和98.52％、96.84％、91.36％;通过3种花色苷组分对抗肿瘤活性分析发现,3种花色苷组分均能显著抑制HepG2肝癌细胞和A549肺癌细胞的增殖和侵袭能力,并且能够显著增加癌细胞的凋亡,其抗肿瘤效果顺序依次为色素Ⅲ＞色素Ⅰ＞色素Ⅳ.