人呼吸道合胞病毒M蛋白非复制型重组腺病毒的构建和鉴定
Construction and Identification of Replication Deficient Recombinant Adenovirus Expressing M Protein of Human Respiratory Syncytial Virus
摘要人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)基质蛋白(matrix protein,M)在RSV形态发生上具有重要作用,因含有CTL及CD4+ T细胞抗原表位,在疫苗研究上具有一定意义.为此,应用RT-PCR 方法从感染RSV的Hep-2 细胞中扩增获得M蛋白基因,构建了含M基因的非复制型重组腺病毒并进行表达和鉴定.基因序列分析显示RSV M基因仅有一处碱基发生错义突变.获得的非复制型重组腺病毒FGAd/RSVM感染293细胞,观察到细胞出现CPE,RT-PCR发现M基因有转录,Western blotting及间接免疫荧光分析检测到M蛋白.成功克隆A亚型RSV Long株M基因,并获得一株可表达A亚型RSV M蛋白的非复制型重组腺病毒FGAd/RSVM,可用于体内研究观察其免疫效果及免疫保护作用.
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