换一批不同来源的谷氨酸棒杆菌氨基脱氧分支酸合成酶的活性分析
The Activity Study of Aminodeoxychorismate Synthase of Differernt Corynebacterium glutamicum
摘要分别以高产L-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)SYPS-062与模式菌株谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum) ATCC 13032的基因组DNA为模板,运用PCR技术扩增出氨基脱氧分支酸合成酶(ADC synthase)的编码基因pabAB.实验结果表明:来源于SYPS-062和ATCC 13032的pabAB片段全长均为1863bp,编码620个氨基酸.两片段存在16个碱基的差异,引起了7个氨基酸的突变.将pabAB连接表达载体pET-28a(+),构建表达质粒pET-28a-pabAB,并转化E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下,E.coli BL21(DE3)(pET-28a-pabAB)高效表达分子量约为67kDa的可溶性蛋白.表达产物带有His-tag标记,选用Ni柱对表达产物进行纯化,纯化后酶活测定结果表明,来源于SYPS-062氨基脱氧分支酸合成酶的比酶活低于ATCC 13032达46.6%.
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