换一批活化型及失活型SUMO1真核表达载体的构建及鉴定
Construction and Identification of Active and Inactive SUMO1 Eukaryotic Expression Vectors
摘要目的:构建活化型及失活型SUMO1(small ubiquitin-related modifier1)真核表达载体并鉴定其蛋白活性.方法:以野生型HA-SUMO1-pcDNA3.1为模板,采用PCR扩增目的基因,将其连接入克隆载体T vector,筛选阳性重组子;将目的基因酶切回收后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1.将阳性克隆转染HEK293细胞,免疫印迹鉴定底物蛋白与SUMO1的结合情况(即SUMO化水平).结果:活化型及失活型SUMO1目的基因被扩增,并且亚克隆入pcDNA3.1,且测序结果与预期一致.免疫印迹分析显示,转染活化型SUMO1组检测到显著的蛋白SUMO化条带,而失活型组则无明显条带.结论:活化型及失活型SUMO1真核表达载体成功构建,并可于HEK293细胞高效表达.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-311X.2014.05.0103-5
发布时间
2014-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金项目（(“脑缺血PSD-95酪氨酸磷酸化对突触后Src信号网络的调控”.No.81173030.“LK3的SUMO化修饰在缺血性脑损伤中的作用”.No.81100852)）
江苏省高校自然科学研究重大项目（(“脑缺血蛋白质类泛素SUMO化修饰的研究”.No.11KJA310005)）
:江苏省高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)
:江苏省青蓝工程
:“徐州医学院振兴计划”资助
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