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重组人抗血栓蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达及纯化

Auto-inducting Expression and Purification of Recombinant Human Anticoagulant Protein in Escherichia coil

二维码有效期 120s

摘要旨在优化重组人抗血栓蛋白(rHAP)工程菌的自诱导培养基,以提高菌体产量及可溶性的重组rHAP蛋白含量.选取蛋白胨、酵母提取物、甘油、葡萄糖为因素,各取4个水平,采用正交表L16(45)进行试验设计,时影响菌体生长和可溶性rHAP表达水平的乳糖浓度进行了优化.结果表明自诱导培养基碳氮源的最优配比:2％蛋白胨,1.5％酵母,0.5％甘油,0.03％葡萄糖,0.2％乳糖.此时表达菌密度OD600和可溶性rHAP目标蛋白表达量分别是未优化前的2.04倍和2.85倍.在20 L发酵表达时,rHAP工程菌OD600值高迭93,菌体温量为1 620 g/20L.利用Q-Sepharose和SP-Sepharose纯化,Western blotting结果表明表达蛋白为目的融合蛋白.

作者龚志飞 ^[1] 杨翔 ^[2] 颜法宝 ^[3] 陈强 ^[4] 孙小强 ^[5] 华子春 ^[4] 学术成果认领

作者单位常州大学石油化工学院,常州213164;常州靶标生物医药研究所有限公司,常州213164;南京大学常州高新技术研究院,常州213164 ^[1] 常州靶标生物医药研究所有限公司,常州213164;南京大学常州高新技术研究院,常州213164 ^[2] 常州靶标生物医药研究所有限公司,常州,213164 ^[3] 南京大学常州高新技术研究院,常州,213164 ^[4] 常州大学石油化工学院,常州,213164 ^[5]

关键词抗血栓蛋白优化培养发酵纯化鉴定

医学主题词蛋白(Egg White)血栓形成(Thrombosis)人(Persons)发酵(Fermentation)大肠杆菌(Escherichia coli)

分类号 Q51（蛋白质）

栏目名称

研究报告

发布时间 2012-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

江苏省自然科学基金（BK2010046,BK2008138,BE2008639,BY2009147）重大新药创制"科技重大专项（2009ZX09103-675,2009ZX09102-206）常州市武进区科技局项目（CS20092003,CQ20100009,CN20100016,CZ20100008）