换一批集胞藻PCC6803中N-乙酰鸟氨酸转氨酶的生化表征及结构分析
Biochemical Characterization and Structural Analysis of N-acetylornithine Transaminase from Synechocystis sp. PCC6803
摘要旨在对集胞藻PCC6803中slr1022基因编码的N-乙酰鸟氨酸转氨酶进行生化表征及结构分析,为进一步研究该酶的催化功能及机制奠定理论基础.以集胞藻PCC6803基因组为模板,通过PCR扩增获得slr1022基因,将其连接到表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态.经IPTG诱导,Ni-NTA亲和层析纯化后获得重组Slr1022蛋白,然后通过紫外分光光度法对Slr1022蛋白的催化功能进行表征,并运用生物信息学软件对该蛋白进行结构分析.成功构建pET28a-slr1022重组表达质粒,并诱导表达重组Slr1022蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定该蛋白分子量约为50 kD,与理论大小相符.Slr1022蛋白与底物N-乙酰鸟氨酸的结合常数Km和最大反应速度Vmax分别是0.12 mmol/L和0.60μmol/(L·s),并且Slr1022蛋白与另一底物α-酮戊二酸的Km和Vmax分别是0.039 mmol/L和0.65μmol/(L·s).Slr1022蛋白在pH 8.5时催化活性最强.Slr1022蛋白和其他来源的N-乙酰鸟氨酸转氨酶氨基酸序列有一定的同源性,而且活性位点的氨基酸残基高度保守.成功克隆并表达纯化出Slr1022蛋白,酶学性质和生物信息学研究表明Slr1022蛋白为N-乙酰鸟氨酸转氨酶.
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DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-1149
发布时间
2021-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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