摘要目的:应用RNA干扰(RNAi)技术特异地干扰HAX-1在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,研究其在过氧化氢诱导的细胞凋亡中的作用.方法:应用载体pSR-GFP/Neo构建针对HAX-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒;转染MCF-7细胞,G418筛选稳定细胞系,Westem blot鉴定筛选的细胞克隆;用流式细胞仪检测筛选的细胞系在过氧化氢条件下的凋亡率.结果:电泳和测序证实合成的siRNA序列正确并准确克隆到pSR-GFP/Neo载体中;Western blot证实获得MCF-7/HAX-1 siRNA稳定细胞株,其HAX-1蛋白水平降低95%左右;用1 mmol/L过氧化氢处理获得的稳定细胞株8 h,细胞凋亡率明显高于对照组.结论:HAX-1能够保护乳腺癌细胞MCF-7免于过氧化氢诱导的细胞凋亡.
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