换一批基于密码子优化策略的斑马鱼FOXP3A分子的原核表达及多克隆抗血清制备
Prokaryotic Expression and Polyclonal Antiserum Produc?tion of Codon Optimized FOXP3A from the Zebrafish(Da?nio rerio)
摘要目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清.方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894 bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价.结果:在16℃经0.5 mmol/L IPTG诱导10 h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×105以上.结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具.
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DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2019.01.009
发布时间
2019-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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