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lncRNA FTX对结肠癌伊立替康耐药株增殖、迁移能力的影响

Effect of lncRNA FTX on proliferation and migration of colon cancer cell line resistant to irinotecan

摘要目的 研究长链非编码RNA FTX(long noncoding RNA FTX,lncRNA FTX)对结肠癌细胞伊立替康(irinotecan,CPT-11)耐药株增殖、迁移的影响.方法 对从lnCAR数据库(https://lncar.renlab.org/)中获取的80例临床样本FTX的表达情况以及70例结肠癌患者生存率进行统计学分析.采用药物浓度梯度构建人结肠癌伊立替康耐药细胞株(HCT-116/CPT-11R),通过CCK-8(cell counting kit-8)测定其耐药指数,并通过荧光实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测正常结肠细胞NCM460、结肠癌细胞HCT-116以及构建的耐药细胞株的FTX表达水平.构建敲低lncRNA FTX的慢病毒载体(sh-FTX)及对照空白载体(sh-NC)转染HCT-116/CPT-11R耐药株中,经过嘌呤霉素筛选获得lncRNA FTX稳定下调的结肠癌细胞耐药株,并通过qPCR鉴定敲低效率.通过克隆形成实验及CCK-8实验分别检测lncRNA FTX对sh-NC组、sh-FTX组耐药细胞克隆形成能力及生长活力的影响.利用划痕实验检测lncRNA FTX对sh-NC组、sh-FTX组耐药株细胞迁移能力的影响.通过Western blot检测sh-NC组、sh-FTX组耐药株细胞增殖相关蛋白c-myc和迁移相关蛋白Vimentin、MTA-1表达水平.结果 统计数据显示,结肠癌患者的FTX表达高于正常人(P<0.01);且生存分析结果显示FTX低表达组的生存率高于FTX高表达组(P<0.05),其中低表达组患者的5年生存率约为高表达组的5倍.结肠癌伊立替康耐药株HCT-116/CPT-11R构建成功,耐药株中lncRNA FTX的表达水平显著高于正常结肠细胞以及结肠癌细胞(P<0.01).sh-FTX能显著降低耐药细胞株中FTX的表达水平(P<0.001).与sh-NC组比较,sh-FTX组HCT-116/CPT-11R的增殖能力和迁移能力被显著抑制(P<0.005).lncRNA FTX被敲低后,HCT-116/CPT-11R细胞中增殖相关蛋白c-myc以及转移相关蛋白Vimentin、MTA-1蛋白表达水平降低,HCT-116耐药株的迁移和增殖能力被显著抑制(P<0.05或P<0.005).结论 lncRNA FTX在结肠癌细胞系耐药株HCT-116/CPT-11R中高表达,体外实验发现敲低lncRNA FTX能显著抑制HCT-116/CPT-11R增殖和迁移能力.

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DOI 10.13753/j.issn.1007-6611.2021.08.004
发布时间 2021-09-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
基金项目
国家自然科学基金(82003220)
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