换一批舍格伦综合征A抗原(SSA60)在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及胶体金快速检测方法的建立
High-level Secreted Expression of Recombinant Human Sjogren's Syndrome Antigen A60 in Methylotrophic Yeast Pichia Pastoris and Establishment of A Rapid Assay with Immunogold
摘要目的 在巴斯德毕赤酵母中表达舍格伦综舍征A抗原(SSA60)并建立肢体金快速检测方法.方法 表达质粒pPIC9k-SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMDI168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和斑点免疫金渗滤法(DIGFA)鉴定.结果 表达产物SSA60的分子量约60 000,高拷贝巴斯德毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的,表达量占分泌总蛋白60%以上,产物浓度为600～950 mg/L.DIGFA检测85份舍格伦综合征(SS)患者血清和30份正常人血清,抗SSA检测阳性率为95.3%(81/85),特异度为100%(30/30).与德国欧蒙ENA酶斑点法对比检测的符合率为96.5%(111/115),差异无统计学意义(P>0.05).结论 SSA60在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达,DIGFA简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的诊断.
更多相关知识
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-7414.2009.01.013
发布时间
2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
福建省青年人才科技创新基金资助项目（(2002J060)）
- 浏览261
- 被引1
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
