换一批HBV DNA C区BCP双突变PCR-FP检测方法的建立及其临床应用
The establishment of detection of the double mutants of the basal core promoter (BCP) of HBV by PCR-Fluorescence polarization (FP)and its clinical application
摘要目的:建立简便的HBV DNA序列中BCP双突变的检测方法.方法: 采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测.首先对HBVC区基因进行PCR扩增,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交,使探针的3'端可以在DNA聚合酶的催化下,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的dNTP,然后检测该3'端带有荧光素的探针,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸.结果: 该方法可以检测出HBV 基因序列中BCP双突变核苷酸类型,可以检测1个拷贝的模板,并且可以从BCP野生型株DNA序列中检出5%BCP双突变DNA序列,对76例HBV DNA阳性患者进行检测,结果HBV BCP基因双突变率为53.9(41/76).结论: 该技术可以对血清中HBV DNA C区BCP双突变.
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