换一批增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化
Gene clone, expression and purification of enhanced green fluorescent protein
摘要目的:研究增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因在大肠杆菌中的基因克隆、重组表达及纯化.方法:采用PCR方法克隆EGFP全长cDNA序列,构建原核表达载体pGEX4T-1-EGFP,经过DNA序列测定证实其序列正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,用谷胱甘肽-Sepharose 4B层析法纯化GST-EGFP融合蛋白.结果:成功地克隆了EGFP全长cDNA序列,并进行原核表达以及蛋白的纯化,GST-EGFP的表达量占菌体蛋白量的40%以上.经纯化后纯度高于90%.菌体超声裂解后上清液及其纯化产物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光.结论:本研究为应用EGFP追踪细胞吞噬功能等动态活动奠定了实验基础.
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医学主题词
蛋白(Egg White)荧光(Fluorescence)基因(Genes)基因复制(Gene Duplication)基因表达调控(Gene Expression Regulation)
分类号
R3（基础医学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-7377.2006.10.001
发布时间
2006-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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