换一批小鼠Mmp-9shRNA重组慢病毒包装、筛选及干扰效果检测
Construction and identification of RNA interference lentivirus vector of mouse matrix metalloproteinase 9 gene
摘要目的:设计、筛选、构建并鉴定Mmp-9小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并构建其慢病毒表达载体,为血管化疾病的防治提供理论依据及实验室数据.方法:针对基质金属蛋白酶9靶基因设计siRNA序列,并合成小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)结构的DNA,与经AgeΙ和EcoRΙ酶切的pSIL-RFP连接、转化大肠杆菌感受态细胞,构建成携带Mmp9-shRNA慢病毒质粒载体(pSIL-RFP/MMP9-shRNA),PCR及测序鉴定后,Western blot筛选出携带最佳siRNA的慢病毒质粒载体,并利用慢病毒包装质粒(pHelper1.0和pHelper2.0)将其制备成MMP9-shRNA慢病毒,并测定病毒滴度为1×1010pfu/l.结果:PCR和DNA测序证实合成的含基质金属蛋白酶9短发卡RNA慢病毒载体寡核苷酸链正确插入pSIL-RFP载体,表明实验成功构建基质金属蛋白酶9RNA干扰慢病毒表达载体.结论:成功的构建并筛选出针对小鼠Mmp9基因沉默的特异性shRNA重组慢病毒,为血管化性疾病的防治研究提供基础.
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医学主题词
病毒(Viruses)基质金属蛋白酶9(Matrix Metalloproteinase 9)小鼠(Mice)基因表达调控(Gene Expression Regulation)慢病毒属(Lentivirus)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-7377.2013.03.001
发布时间
2013-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30772260）
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