换一批三氧化二砷对HepG2细胞STMN1表达的影响及沉默STMN1对HepG2细胞凋亡的促进作用
Effect of arsenic trioxide on STMN1 expression in HepG2 cells and role of silencing STMN1 in facilitating apoptosis of HepG2 cells
摘要目的 观察三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞的增殖抑制情况及对STMN1表达的影响,探讨沉默STMN1表达对HepG2细胞凋亡的促进作用.方法 取对数生长期HepG2细胞,应用0、0.5、1、2、5、10 μmol/L浓度的As2O3处理48 h,采用MTT法测定细胞增殖率,计算As2O3对HepG2细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50);不同浓度As2O3处理48、72、120 h取细胞,采用实时荧光定量PCR法检测STMN1 mRNA相对表达量.取对数生长期HepG2细胞分为实验组和对照组,实验组应用IC50浓度(7.212μmol/L)的As2O3处理,对照组仅更换培养基,处理48 h时采用Western blot法检测STMN1蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡.取对数生长期HepG2细胞分为转染组(转染STMN1-siRNA)和阴性对照组(转染NC-siRNA),转染48 h采用实时荧光定量PCR法检测STMN1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测STMN1、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡;转染12、24、48、72 h时采用MTT法检测细胞增殖.结果 (1)0、0.5、1、2、5、10 μmol/L浓度As2O3 处理 48 h,HepG2 细胞增殖率[1、(0.89±0.06)％、(0.87±0.59)％、(0.73±0.02)％、(0.53±0.02)％、(0.47± 0.01)％]比较差异有统计学意义(F=131.90,P＜0.001).As2O3 对 HepG2 细胞的 IC50值为 7.212 μmol/L.(2)STMN1 mRNA相对表达量随As2O3浓度增高依次降低(P＜0.001),随As2O3作用时间延长依次降低(P＜0.001).(3)IC50浓度 As2O3 处理 48 h,实验组细胞凋亡率[(17.67±0.70)％]高于对照组[(2.33±0.25)％](t=35.280,P＜0.001),STMN1 蛋白相对表达量(24.79±1.08)低于对照组(68.48±5.63)(t=13.200,P＜0.001).(4)转染 48 h,转染组 STMN1 mRNA(0.34±0.01)、蛋白(26.30±12.49)相对表达量均低于阴性对照组(0.93±0.03、82.71±15.67)(t=28.540,P＜0.001;t=48.770,P＜0.001).转染组转染 24、48、72 h 细胞增殖吸光度值(0.43±0.03、0.50±0.02、0.61±0.03)均低于阴性对照组(0.53±0.02、0.71±0.04,0.93±0.03)(t=4.470,P=0.010;t=8.600,P=0.011;t=13.490,P＜0.001),转染12 h细胞增殖吸光度值(0.34±0.01)与阴性对照组(0.38±0.03)比较差异无统计学意义(t=2.680,P=0.060).(5)转染48 h,转染组细胞凋亡率[(19.47±0.25)％]高于阴性对照组[(2.27±0.15)％](t=101.200,P＜0.001),Bcl-2 蛋白相对表达量(129.91±1.740)低于阴性对照组(483.71±9.30)(t=64.740,P＜0.001),Bax(482.59±10.64)、cleaved caspase-3(507.24±11.21)蛋白相对表达量均高于阴性对照组(223.99± 6.66、274.30±8.43)(t=35.690,P＜0.001;t=28.760,P＜0.001).结论 As2O3 可下调 HepG2 细胞 STMN1 表达、促进HepG2细胞凋亡,敲低HepG2细胞STMN1表达可促进HepG2细胞凋亡.
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