摘要目的 探讨miR-377-3p在高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮-间质转化(EMT)中的作用及可能的分子机制.方法 对数生长期HK-2细胞用含5.5、10、20、30、40 mmol/L葡萄糖的MEM培养基培养48 h,采用CCK-8法检测细胞活性,并筛选出适宜的高糖处理浓度(30 mmol/L).对数生长期HK-2细胞分为高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇),均采用MEM培养基培养,高糖组根据培养时间再分为高糖0 h组、高糖24 h组、高糖48 h组、高糖72 h组,分别培养0、24、48、72 h,甘露醇组培养72 h;采用实时荧光定量PCR法检测miR-377-3p 及 E-cadherin、α-SMA、SIRT1 mRNA 相对表达量,采用 Western blot 法检测 E-cadherin、α-SMA、SIRT1 蛋白相对表达量,筛选出适宜的高糖处理时间(48 h).对数生长期HK-2细胞分为NC组(MEM培养基正常培养)、mimics组(转染 miR-377-3p mimics)、mimics-NC 组(转染 miR-377-3p mimics-NC)、inhibitor 组(转染 miR-377-3p inhibitor)、inhibitor-NC组(转染miR-377-3p inhibitor-NC),转染6 h后更换含30 mmol/L葡萄糖的MEM培养基继续培养48 h;采用实时荧光定量PCR法检测miR-377-3p及E-cadherin、α-SMA、SIRT1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测E-cadherin、α-SMA、SIRT1蛋白相对表达量.结果 10、20、30、40 mmol/L葡萄糖处理时HK-2细胞活性均低于5.5 mmol/L葡萄糖处理(P＜0.05).不同培养时间高糖组、甘露醇组miR-377-3p及E-cadherin、α-SMA、SIRT1 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(F=4.421～54.140,P均＜0.05);高糖48 h组miR-377-3p相对表达量高于高糖0 h组(P＜0.05);高糖48 h组、高糖72 h组E-cadherin、SIRT1 mRNA及蛋白相对表达量均低于高糖0 h组(P＜0.05),α-SMA mRNA及蛋白相对表达量均高于高糖0 h组(P＜0.05).转染实验5组miR-377-3p及E-cadherin、SIRT1 mRNA和E-cadherin、α-SMA、SIRT1蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(F=4.843～118.500,P均＜0.05),α-SMA mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(F=0.997,P=0.453);mimics组miR-377-3p相对表达量(234.90±37.25)高于 NC 组(0.94±0.14)(P＜0.05),mimics-NC 组、inhibitor 组、inhibitor-NC 组与 NC 组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);mimics 组 E-cadherin mRNA、SIRT1 mRNA 及蛋白相对表达量(0.17±0.08、0.56±0.11、0.59±0.14)均低于 NC 组(1.01±0.01、1.01±0.01、0.86±0.09)(P＜0.05),α-SMA 蛋白相对表达量(0.94±0.06)高于NC组(0.67±0.09)(P＜0.05),E-cadherin蛋白相对表达量与NC组比较差异无统计学意义(P＞0.05);inhibitor组E-cadherin 蛋白、SIRT1 mRNA 及蛋白相对表达量(1.59±0.30、1.42±0.15、1.08±0.09)均高于 NC 组(0.92±0.14、1.01±0.01、0.86±0.09)(P＜0.05),α-SMA 蛋白相对表达量(0.48±0.06)低于 NC 组(0.67±0.09)(P＜0.05),E-cadherin mRNA 相对表达量与 NC 组比较差异无统计学意义(P＞0.05);mimics-NC 组、inhibitor-NC 组 E-cadherin、SIRT1 mRNA及E-cadherin、α-SMA、SIRT1蛋白相对表达量与NC组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高糖刺激48 h可上调HK-2细胞miR-377-3p表达;过表达miR-377-3p可促进HK-2细胞发生EMT,而抑制miR-377-3p表达则减轻这一过程;miR-377-3p可能通过靶向SIRT1参与高糖刺激下HK-2细胞EMT.