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骨髓间充质干细胞通过外泌体对脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症的抑制作用

Inhibition of lipopolysaccharide-induced RAW 264.7 cell inflammation by human bone marrow mesenchymal stem cells via exosomes

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摘要目的分析骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)外泌体(mesenchymal stem cells exosome,MSC-Exo)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW 264.7细胞炎症的抗炎作用及其可能的机制.方法从小鼠骨髓提取MSC细胞,通过原代培养方法培养传代.提取并验证间充质干细胞条件培养基(mesenchymal stem cell conditioned medium,MSC-CM)及MSC-Exo对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症的抑制作用.通过LPS刺激RAW 264.7细胞4～6 h后,细胞计数及MTT法检测细胞增殖活性;Western blot检测MSC-CM中的MSC-Exo,电镜观察MSC-Exo形态,纳米粒度仪测定MSC-Exo大小;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测LPS诱导的RAW 264.7细胞中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)的mRNA转录水平;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)评估LPS诱导的RAW 264.7细胞中细胞因子IL-6、IL-10的分泌.结果与LPS组比较,MSC-Exo具有抗炎作用,在30 h后LPS诱导的细胞中细胞因子IL-6的分泌显著降低,差异有统计学意义(P<0.001).MSC-Exo可抑制IL-6 mRNA转录,促进Arg-1 mRNA转录及IL-10表达.结论本研究初步证明了MSC-Exo可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症.