换一批复苏促进因子Rpf结构域突变体蛋白的原核表达和纯化
Expression in E. coli of Micrococcus luteus Rpf domain mutants and its purification
摘要[目的]构建藤黄微球菌复苏促进因子Rpf结构域突变体基因E54K、E54A的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达和纯化.[方法]采用PCR方法从藤黄微球菌基因组中扩增出Rpf结构域F,54A、E54K突变体基因,连接进入pMD-18T载体中,测序正确的基因插入到pGEX-4T-1表达载体中,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定表达蛋白,利用Rpf结构域单克隆抗体进行Western-blotting分析.用GS-4B亲和层析柱纯化目的蛋白.[结果]获得藤黄微球菌Rpf结构域E54K和E54A突变体基因,测序结果与GenBank公布的序列相同,突变体位点与设定一致;表达蛋白相对分子质量与文献报道一致;Western-blotting结果显示,在相对分子量约32 KD处有与Rpf结构域单克隆抗体特异性结合带.通过GS-4B系统,得到纯化的GST融合蛋白.[结论]成功表达、纯化了Rpf结构域突变体E54K、E54A融合蛋白,为上述蛋白在结核病中的应用奠定基础.
更多相关知识
- 浏览161
- 被引0
- 下载8
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
