换一批原核表达hbFGF结构与功能优化的研究
Study on Optimizing The Structure and Function of hbFGF Expressed in Escherichia coli
摘要野生型hbFGF蛋白可溶性与稳定性较低一直是困扰研发人员的难题.分析其氨基酸序列发现含有4个游离巯基,其中第78、96、101位半胱氨酸游离巯基可能直接影响其可溶性、稳定性及活性. 对天然hbFGF进行定点突变,一组将Cys78、Cys96同时突变,另一组将Cys78、Cys96与Cys101进行联合突变,均改为丝氨酸密码子,然后克隆入原核表达载体pET-3c,进行表达, 结果发现两种突变蛋白的可溶性大幅度增加,稳定性明显上升,其中三点突变的效果更为显著,但蛋白质的活性明显下降.可以认为78、96与101位半胱氨酸的游离巯基同时参与了天然hbFGF多聚体的形成,是导致野生型hbFGF可溶性与稳定性较低的主要原因,Cys101还与维持hbFGF的活性直接有关.
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栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:0001-6209.2004.04.021
发布时间
2004-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划（863计划）（Z18-03-29）
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