摘要目的 瞬时表达人内源性逆转录病毒W家族包膜蛋白(human endogenous retroviruses W family Env protein,HERV-W Env),将其作为免疫原制备单克隆抗体(monoclonal antibody,mAbs)并对mAbs进行鉴定研究.方法 采用构建成功的pcDNA3.4(+)-HERV-W Env-His重组质粒(简称HERV-W Env重组质粒)瞬时转染Expi 293F细胞进行蛋白表达;采用二喹啉甲酸(bicinchoninic acid assay,BCA)法、SDS-PAGE及Western blot检测蛋白浓度、相对分子质量、纯度及特异性.免疫BALB/c小鼠并通过杂交瘤技术制备mAbs,采用BCA、SDS-PAGE、Western blot、ELISA及表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)法分别检测mAbs的浓度、纯度、特异性、亚型、结合活性、阻断活性及亲和力.结果 获得了浓度为 1.2 mg/mL的HERV-W Env蛋白,SDS-PAGE结果显示其完整蛋白的相对分子质量约为55 000,去糖基化后相对分子质量与理论值36 300 一致,蛋白纯度为90%;Western blot结果显示其可被特异性抗体识别.免疫BALB/c小鼠血清效价均达到 1×105;筛选得到 6 株mAbs,浓度为 0.63～10.00 mg/mL;抗体亚型均为IgG1 κ亚型;SDS-PAGE结果显示6 株mAbs的抗体结构以及重轻链完整,纯度均>90%;Western blot结果显示 6 株mAbs均可与HERV-W Env蛋白氨基酸表位结合;6 株mAbs结合活性为 6.12～21.06 ng/mL,阻断活性为0.28～2.10 μg/mL;选结合活性及阻断活性较好的mAb 7H8、4A6、2C1 检测亲和力,亲和力常数依次为 0.15、0.52、0.68 nmol/L.结论 以HERV-W Env蛋白为免疫原制备的 6 株mAbs,均展现出良好的结合活性、阻断活性,其中3 株mAb具有良好的亲和力,这 6 株 mAbs 可作为针对多发性硬化(multiple sclerosis,MS)、1 型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)等疾病的创新抗体药物候选抗体株进行下一步的研究.