换一批摘要目的 建立一种基于实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术的检测方法,用于检测Vero细胞主细胞库(master cell bank,MCB)以及猪源性胰蛋白酶中潜在的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)和猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV).方法 分别提取MCB细胞和猪源性胰蛋白酶中的DNA,采用实时荧光定量PCR技术特异性扩增供试品中的猪源病毒核酸序列,从而检测供试品是否受到PCV和PPV的污染.在方法建立阶段首先确定了灵敏度,随后对该方法的特异性、重复性和耐用性进行验证.通过与牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhoea virus,BVDV)的对比实验来确认该方法的特异性;通过多次检测同一样品来评估结果的重复性;通过检测在不同放置时间下的反应体系来考察方法的耐用性.结果 成功建立了qPCR检测Vero细胞MCB和猪源性胰蛋白酶中PCV和PPV的方法.该方法的灵敏度高,最低检测限可达 1 copies/μL,检测范围广泛,可覆盖 1×101～1×106 copies/μL的浓度范围.经检验,该方法在BVDV和不同猪源性病毒之间无交叉反应,特异性良好.同一样品经多次检测所得结果一致.且反应体系稳定,在 4℃条件下放置 3h后仍可正常扩增.结论 建立的qPCR方法可以较有效检测Vero细胞主细胞库及猪源性胰蛋白酶等生物制品原辅料中的猪源性病毒(包括PPV和PCV).该方法不仅具有较高的灵敏度和特异性,而且操作简便、易于推广,可为生物制品的安全性和质量控制提供了有力的技术支持.
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关键词
外源性病毒检测猪源性病毒猪圆环病毒猪细小病毒实时荧光定量PCRExogenous virus detectionPorcine virusPorcine circovirusPorcine parvovirusQuantitative real-time PCR
栏目名称
DOI
10.13309/j.cnki.pmi.2025.05.007
发布时间
2025-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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