摘要目的 从人血浆中提取高浓度人纤维蛋白溶酶原(human plasminogen,Pg)制剂,获得高产率、高纯度、高比活的Pg成品,提高血浆综合利用率,加快国产化耗材替代进口的研究.方法 人血浆为原料经过澄清过滤后,依次进行阴离子交换层析、亲和层析捕获、阳离子交换精纯制备Pg,提取Pg工艺经过有机溶剂/去污剂(solvent/detr-gent,S/D)和孔径20 nm纳米膜过滤,经两步病毒灭活来保障Pg的安全性,并进行冻干保存.通过计算阴离子交换层析流穿液和亲和层析流穿液中抗原蛋白的回收率,评价阴离子交换层析和亲和层析对人纤维蛋白原(human fi-brinogen,Fg)、静注人免疫球蛋白G(intravenous immunoglobulin G,IgG)、人血白蛋白(human albumin,ALB)、人α1-抗胰蛋白酶(human α1-antirtypsin,AAT)及人C1-酯酶抑制剂(human C1-esterase inhibitor,C1-INH)抗原回收率的影响,进一步证明Pg制备工艺提高血浆综合利用率的可行性;通过检测 3 批制备工艺各步骤样品中蛋白的抗原含量,计算Pg步骤抗原回收率及其变异系数(coefficient of variation,CV),CV<10.000%为标准衡量Pg制备工艺的稳定性;检测样品中Pg抗原含量及主要杂质蛋白IgG、IgA、IgM、ALB的抗原含量,计算Pg在样品中的相对纯度,检测样品总蛋白含量,计算Pg的比活,评价Pg制备工艺的有效性;通过检测S/D灭活病毒滴度,判断病毒灭活效果,提高Pg制品的安全性.结果 阴离子交换层析和亲和层析收集的流穿液(flow through,FT)中ALB、IgG、AAT、Fg及C1-INH的抗原回收率均>95.000%,本工艺在提取Pg的同时不影响其他主要蛋白的抗原回收率,对于提高血浆综合利用率是可行的;3 批Pg制备工艺各步骤抗原回收率CV<10.000%,Pg制备工艺稳定性好;亲和层析纯化后Pg的相对纯度>98.000%,阳离子交换层析纯化后Pg的相对纯度>99.000%;血浆澄清过滤后样品的比活<0.020 IU/mg,亲和层析后样品的比活提高至>6.000 IU/mg,S/D病毒灭活后样品的比活下降至 2.000～4.000 IU/mg之间,阳离子交换层析后样品Pg比活提高至>5.000 IU/mg以上,3批成品Pg比活分别为4.313、4.351、4.192 IU/mg,成品Pg比活相对血浆中Pg比活提高了至少 200 倍,本工艺制备Pg有效;本制备工艺Pg抗原总回收率分别为 70.836%、67.260%、68.639%,1 吨血浆可以制备Pg抗原量为77.920、73.990、75.503 g,本制备工艺Pg产率高;S/D病毒灭活可以降低样品的病毒滴度,有效提高了Pg制品的安全性.结论 从人血浆中制备Pg的制备工艺稳定性好,可以提取高比活、高产率、安全有效的高浓度Pg制品,并有效提高了血浆综合利用率,适于作为Pg规模化生产工艺储备.