换一批一种耐低温α-乙酰乳酸脱羧酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达
High-Level Expression of Cold-Adapted α-acetolactate Decarboxylase in Bacillus subtilis
摘要从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中.SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilis WB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103.采用Ni柱亲和层析纯化重组ALDC,所得纯酶的比酶活为272.3 U/mg,总回收率为89.8％.该重组ALDC最适反应温度仅为25℃,在20～35℃范围内均表现出较高的活性.Ni2+对ALDC有一定的激活作用,Fe3+使ALDC活性完全丧失.经摇瓶培养,重组菌的ALDC酶活为27.0 U/mL,约为出发菌酶活的70倍.经5L的发酵罐发酵放大试验,ALDC酶活最高可达75.9 U/mL.
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分类号
Q939.97（应用微生物学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-1689.2013.05.011
发布时间
2013-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家973计划项目（(2012CB725202)）
国家863计划项目（(2011AA02A211)）
国家自然科学基金项目（(21276110,30970056)）
教育部新世纪优秀人才计划项目（(NCET-10-0459)）
高等学校博士学科点科研基金专项（(20110093120001)）
中央高校基本科研资金专项（(JUSRP51306A)）
:江苏高校优势学科建设工程项目
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