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S100A10过表达载体构建及其对鹿茸干细胞成骨分化的影响

Construction of S100A10 Overexpression Vector and Its Effect on Osteogenesis of Antler Stem Cells

摘要该文旨在构建及鉴定过表达梅花鹿S100A10基因的慢病毒载体,研究S100A10对鹿茸储备间充质干细胞(reserve mesenchyme cells,RMCs)成骨分化的影响.利用PCR技术扩增S100A10的编码区,并将其与双酶切后的慢病毒表达载体质粒PCDH连接,构建过表达S100A10的重组质粒.包装病毒,感染鹿茸RMCs,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞感染效率.用碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量检测细胞早期成骨分化水平,茜素红染色检测细胞晚期成骨分化水平,qRT-PCR检测骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)的mRNA表达水平.结果显示,该研究成功构建了S100A10过表达慢病毒载体,过表达组S100A10 mRNA及蛋白水平较对照组显著上升(P＜0.001).与对照组相比,过表达组的ALP活性,钙化结节形成量(P＜0.01)以及成骨分化标志基因BMP-2、Runx2和OCN的mRNA水平均显著提高.综上所述,S100A10可促进鹿茸RMCs的成骨分化,这为进一步研究S100A10促进鹿茸成骨的机制奠定了基础.