换一批棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和 Western 鉴定
Construction of Prokaryotic Expression Vector, Protein Purification and Identification of GhCOMT1 Gene from Gossypium hirsutum L.
摘要为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,在0.2 mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱( His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达产物.结果表明:16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达,其中16℃诱导12 h的蛋白表达量最大；SDS-PAGE检测目的蛋白相对分子量约为39.748 kD; Western blotting分析表明,目的蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应.
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DOI
10.3969/j.issn.1000-4025.2012.10.006
发布时间
2013-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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