换一批葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立
Isolation of Protoplast and Establishment of Transient Expression System in Grapevine (Vitis vinifera L.)
摘要为了建立葡萄原生质体进行遗传转化的技术,该研究以葡萄品种‘黑香蕉’的叶片和愈伤组织为材料,分析纤维素酶和离析酶的浓度与配比、渗透压和酶解时间等主要因素对葡萄原生质体分离的影响,探讨建立稳定、高效的葡萄原生质体分离与瞬时转化体系,为鉴定目标基因的功能奠定基础.结果表明:(1)葡萄叶片原生质体的分离以3.0％纤维素酶和0.75％离析酶的酶组合,在0.6 mol/L甘露醇溶液中,酶解14h为宜,每克游离产量为4.09×10 6个原生质体,活力为83.12％.(2)葡萄愈伤组织原生质体的分离以2.0％纤维素酶和0.5％离析酶的酶组合,在0.5 mol/L甘露醇溶液中,酶解14h为宜,每克游离产量为6.05×10 6个原生质体,活力为84.13％.(3)利用该方法得到的葡萄原生质体为受体,采用40％ PEG-4000介导转化质粒载体pEZS-NL,目标基因瞬时表达产物检测表明,GFP蛋白表达稳定、清晰.该研究建立的葡萄原生质体制备和转化体系,可以用较少量的质粒DNA获得外源基因在原生质体内的表达,为葡萄功能基因的研究提供技术支持.
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栏目名称
DOI
10.7606/j.issn.1000-4025.2015.06.1262
发布时间
2015-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31471842）
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