换一批昆明小鼠胰腺干细胞分离培养及特异性标志物巢蛋白的鉴定
Isolation and culture of pancreatic stem cells from Kunming mouse and the identification of Nestin as its specific marker
摘要探讨胰腺干细胞的分离、培养及其特异性标志物巢蛋白鉴定的基本技术方法.选取新生昆明种小鼠25只,分离胰腺组织,Ⅴ型胶原酶消化,结合自然沉降技术形成不连续密度梯度离心.分别从磷酸盐缓冲液/1.068 g/L Percoll液(第一界面)、1.068 g/L Percoll液/1.096 g/LPercoll液(第二界面)、1.096 g/L Percoll液/1.188 g/L Percoll液(第三界面)收集细胞.各界面细胞均加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM低糖培养基,置于经多聚赖氨酸处理的培养瓶中常规培养.24 h后将培养基更换为不含胎牛血清的DMEM低糖培养基,并加入10 mg/L的角质细胞生长因子和20 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子,观察体外培养的各界面细胞的形态学特征.胰腺的内分泌部存在β细胞,双硫腙能与β细胞分泌颗粒中的锌螯合而呈现铁红色.将收集的各界面细胞进行双硫腙染色,检测细胞来源.免疫组织化学法检测各界面巢蛋白的表达.结果第一、二界面细胞65%～90%双硫腙染色呈阳性,来源于胰腺的内分泌部;第三界面细胞双硫腙染色呈阴性,来源于胰腺的外分泌部.从胰腺的内分泌部获得的细胞聚集呈胰岛样细胞团贴壁生长,48～72 h后可见许多大、圆、单个核的细胞从胰岛样细胞团中向周围长出,以附壁生长的方式在局部形成细胞集落.从胰腺的外分泌部获得的细胞主要呈上皮样生长,并逐渐汇合成片,在上皮样细胞集落的周围可见大、圆、单个核的细胞生长并形成集落.各界面大、圆、单个核的细胞,巢蛋白均呈阳性表达.提示从胰腺内、外分泌部的组织中能成功获取胰腺干细胞特异性标志Nestin表达阳性的干样细胞.
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分类号
R3（基础医学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1673-8225.2007.07.030
发布时间
2007-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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