换一批
换一批无病毒可回复性肝细胞永生化载体的构建和结构鉴定
Construction and characterization of a vector for virus-free hepatocyte reversible immortalization
摘要目的 构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体,优化目前的肝细胞永生化方法.方法 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体,PCR扩增attB1-Kozak -hTERT(前端)-attB2和attB1 -hTERT(后端)/E2A/eGFP/F2A/neo-attB2,对相应大小条带切胶回收后,通过Gateway重组克隆技术BR反应和LR反应,以及酶切连接,构建最终目的载体PB -hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo.结果 PCR及酶切和测序鉴定均证实成功构建了肝细胞永生化载体PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo,目的基因序列与GenBank报道一致.结论 成功构建不携带病毒基因且可实现回复的肝细胞永生化载体,有望提高永生化肝细胞临床应用的安全性.
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主题词
肝细胞(Hepatocytes)性(Sex)人(Persons)RNA指导的DNA聚合酶(RNA-Directed DNA Polymerase)肝, 人工(Liver, Artificial)
分类号
R657.3
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1672-2159.2012.02.001
发布时间
2012-10-29
基金项目
广东省教育部产学研结合项目
广东省科技计划项目
广东省高等学校人才引进专项资金项目
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