换一批小鼠趋化因子受体7特异性shRNA腺病毒表达载体的构建和鉴定
CONSTRUCTION AND IDENDIFICATION OF MOUSE CC-CHEMOKINE RECEPTOR 7-SPECIFIC shRNA ADENOVIRAL EXPRESSION VECTOR
摘要目的 构建小鼠CC趋化因子受体7(CCR7)基因特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,研究其对CCR7分子表达的影响.方法 根据小鼠CCR7 mRNA序列,设计三个shRNA序列,并插入表达载体pHBAd-U6-GFP中,经基因测序鉴定.然后用获得的重组CCR7 shRNA表达载体转染人胚肾细胞HEK293,进行病毒包装、出毒和扩增,测定病毒滴度TCID50,并用重组腺病毒感染小鼠MEF细胞,观察细胞绿色荧光强度,Western Blotting检测CCR7蛋白的表达.结果 基因测序证明:获得的三个shRNA载体序列与原设计序列完全相符,扩增后的病毒上清滴度分别为:1.0×1010、1.6×1010和1.25×1010 PFU/mL.Ad CCR7 shR-NA1腺病毒可明显下调小鼠MEF细胞CCR7蛋白表达.结论 成功构建了小鼠CCR7特异性shRNA腺病毒表达载体,并获得了高滴度病毒上清,为以后研究肿瘤淋巴转移的分子机制和信号通路打下了坚实的基础.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-332X.2015.11.009
发布时间
2015-12-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省医学科学技术研究基金（A2015375）
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