换一批
换一批利用锁核酸化学偶联FokⅠ核酸酶靶向切割HBV基因的体外实验
Locked nucleic acid couples with Fok Ⅰ nucleases to target and cleave hepatitis B virus's gene in vitro
摘要：
乙肝病毒(HBV)是有缺口的双链DNA病毒,侵入人体肝细胞后形成共价闭合环状DNA(cccDNA)持续复制,并在逆转录过程中随机整合入宿主基因组.慢性乙型肝炎感染者平均每个细胞中含有33个cccDNA拷贝,半衰期长达35～57 d,很难从体内彻底清除.利用锁核酸抑制HBV转录,是乙肝治疗的新策略.此外,利用基因组编辑技术靶向切割HBV基因组,有望从源头治愈乙型肝炎.基于锁核酸与双链DNA形成三股螺旋的能力、抵御核酸酶及聚合酶的稳定性以及对单碱基错配的敏感性,本研究以靶向切割乙型肝炎病毒为例,设计构建锁核酸修饰的寡核苷酸作为DNA结合域,有效增强对靶基因的特异性识别;同时利用FokⅠ核酸酶分子量小、二聚化时才具有酶活等特点,设计构建FokⅠ切割域二聚体重组蛋白作为DNA切割域;进而通过双功能交联剂GMBS,建立了5'端氨基(-NH2)修饰的锁核酸与N端巯基(-SH)修饰的FokⅠ核酸酶定向化学偶联的方法,并在体外验证了新型工具对HBV基因的靶向切割.该方法为此后在体内进行高特异性、无整合风险的抗病毒基因治疗提供了全新的技术思路.
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作者：
作者单位：
复旦大学生命科学学院,遗传工程国家重点实验室,上海200433
[1]
上海近岸科技有限公司,上海,201203
[2]
生工生物工程(上海)股份有限公司,上海,201611
[3]
期刊：
《遗传》2016年38卷4期 350-359页
MEDLINEISTICPKUCSCDBP
栏目名称：
技术与方法
DOI：
10.16288/j.yczz.15-435
发布时间：
2016-06-29
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