换一批5个品系小鼠胚胎干细胞系建立的方法学比较
Comparison of the Method Establishing Embryonic Stem Cell Lines from Five Different Mouse Strains
摘要以70%的大鼠心脏细胞条件培养基(RH-CM)为培养液,以小鼠胚胎成纤维细胞(PMEF)为饲养层,采用添加1%鸡血清的消化液和"连续离散法"作为小鼠ES细胞建系的改进方法,比较了5个品系小鼠ES细胞系建立的特点.与常规方法相比,3个近交系小鼠129/ter、C57BL/6J、BALB/c的ES细胞建系率分别由11.8%、3.7%和2.9%提高到33.3%、13.3%和19.4%,差异十分显著;直接采用改进的方法建立KM和ICR小鼠ES细胞系,建系率分别达12%和42.1%.讨论了ICM增殖的时间,即离散时机对ES集落形成及建系率的影响,结果显示:129/ter、C57BL/6J、BALB/c、KM和ICR小鼠品系ICM适宜的离散时机分别为增殖4～6 d、3～3.5 d、4 d、4～5 d和4～5 d;同时,讨论了不同ES细胞建系所需最适宜的消化液浓度,其中BALB/c小鼠的ES细胞对高浓度的消化液十分敏感,0.05% Trypsin-0.008% EDTA是其比较理想的离散浓度.设计了两种离散方法,即"一次离散法"和"连续离散法",用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落,结果表明:后者在建系过程中的作用明显优于前者.RH-CM与添加LIF的常规ES细胞培养基相比,不但具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型的作用,而且明显促进ES细胞的贴壁生长.新建细胞系鉴定结果表明,这一改进方法有效地维持了其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征.
更多相关知识
- 浏览251
- 被引34
- 下载30
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
