换一批摘要为探讨G81R位点突变对RAB5A蛋白功能的影响,将RAB5A G81R突变体和正常RAB5A反义RNA分别插入pcDNA3.1/V5-His(c) TOPO真核表达载体,并转染到Anip973细胞.用Western blot方法检测稳定转染后细胞RAB5A蛋白的表达水平,通过血清饥饿法使Anip973和转染后的细胞同步化,停滞于G0～G1期,再恢复血清培养使细胞从G0～G1期释放,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分比.结果显示RAB5A G81R突变体的反义RNA可完全封闭Anip973细胞中RAB5A的表达,正常RAB5A反义RNA部分封闭RAB5A表达.并且,Anip973细胞周期的长短与RAB5A的表达程度成反比.RAB5A G81R反义RNA能够有效地阻断Anip973细胞中RAB5A蛋白的表达.阻断或降低RAB5A的表达可延长细胞周期.
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