换一批摘要目的 构建人BRE1B基因真核表达载体,并初步探讨该基因对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响.方法 将传代培养的眼B16黑色素瘤细胞随机分为实验组(转染pCMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒)和对照组(转染pCMV质粒).以乳腺癌文库为模板应用PCR技术扩增出人BRE1B基因的CDS编码区序列,构建pCMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒,将pCMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒和pCMV质粒瞬时转染眼B16黑色素瘤细胞后,应用Western blot法检测BRE1B蛋白的表达,应用CCK8法和克隆形成法检测该重组质粒对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响.结果 PCR技术扩增出人BRE1B基因CDS编码区序列,且条带与预期大小一致;与对照组相比,茵液PCR鉴定结果为阳性,双酶切的条带长度分别为大约4000 bp和3050 bp,测序鉴定人BRE1B基因的编码序列与插入的DNA序列完全一致;Western blot结果表明pCMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒在实验组眼B16黑色素瘤细胞成功表达,对照组则未检测到特异条带;CCK8法和克隆形成法结果表明pCMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒能够抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长.结论 本研究成功构建了带有pCMV-Tag-2B标签的人BRE1B基因真核表达载体,并发现该基因抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长.
更多相关知识
分类号
R739.7（眼肿瘤）
栏目名称
DOI
10.13389/j.cnki.rao.2017.0278
发布时间
2018-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金资助（(编号,81472589,81672602,81402345,81502264)）
National Natural Science Foundation of China （(81472589,81672602,81402345,81502264)）
- 浏览213
- 被引0
- 下载24
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
