换一批摘要目的:建立报告基因法(reporter gene assay,RGA)检测重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)生物学活性.方法:通过IL-β刺激D10G4.1-NFκB-Luc细胞产生荧光,IL-1 Ra抑制此反应,且抑制的效果与其用量具有线性关系测定其生物学活性.对细胞密度、刺激性物质IL-1β的量、拮抗物质IL-1Ra的量、稀释梯度及孵育时间等进行摸索后建立方法,对方法的准确度、线性范围、专属性和耐用性进行考察;用建立的方法与通用法:A375.S2细胞活性法进行比对.结果:成功建立了 RGA检测IL-1Ra生物学活性,该方法在效价水平范围50％～160％检测结果的相对偏差均在±12％范围内,回归方程的斜率为1.001 3,相关系数为0.999 8,对不同细胞代次、细胞密度及培养时间考察耐用性的几何变异(GCV)为4.0％.方法 耗时较短,检测结果与A375.S2细胞活性法一致,且精密度及准确性都具有显著提高.结论:成功建立了报告基因法检测IL-1Ra生物学活性,并通过了方法验证,可替代A375.S2细胞活性法用于产品的质量控制.
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关键词
重组人白细胞介素-1受体拮抗剂IL-1β报告基因法方法学验证interleulein-1 receptor antagonists(IL-1 Ra)interleulein-1 β(IL-1 β)reporter gene assaymethodological validation
分类号
R913（药物基础科学）
栏目名称
DOI
10.16155/j.0254-1793.2023.12.05
发布时间
2024-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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