换一批原子力显微镜观察细胞膜水通道AQP-3分布
Distribution of AQP-3 protein on cell membrane observed under atomic force microscope
摘要目的 构建水通道3(AQP-3)/血凝素(HA)融合标签载体,使用原子力显微镜(AFM)观察AQP-3在细胞膜的分布.方法 采用重叠聚合酶链反应(PCR)法将AQP-3/HA标签基因克隆到AQP-3的DNA序列中,构建真核表达载体,挑取单克隆菌落PCR初步鉴定后进行测序鉴定;质粒转染细胞后,采用免疫荧光标记HA标签蛋白,激光共聚焦显微镜下观察荧光标记并拍照;胶体金标记转染成功的细胞上HA标签,AFM观察胶体金颗粒从而分析AQP-3蛋白分布.结果 将HA标签蛋白插入AQP-3第二个胞外段,即T149-Y150之间,成功构建了融合表达载体pIRES2-AQP3/HA-EGF;共聚焦显微镜观察到转染成功的细胞发绿色荧光,AQP-3/HA融合蛋白呈蓝色荧光,其主要分布于细胞膜;AFM观察到细胞表面凹凸不平并伸出片状伪足和丝状伪足,AQP-3/HA在细胞膜表面分布有差异性,其在突起部位分布较多.结论 将HA标签插入AQP-3第二个胞外段,可减小对其功能影响,联合胶体金和AFM识别HA标签蛋白,能够实现AQP-3在细胞膜的示踪标记.
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DOI
10.13276/j.issn.2097-1656.2022.06.012
发布时间
2022-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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