换一批
换一批摘要目的:构建NOEY2基因真核表达载体,研究其对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231生长的影响.方法:RT-PCR获得目的基因编码区,经T/A策略克隆后,再亚克隆至pcDNA3,获得真核表达载体.用lipofectAMINE辅助转染MDA-MB-231细胞,经G418长期筛选而获得稳定转染细胞克隆.Western印迹检测NOEY2蛋白水平的表达.通过记录生长曲线和流式细胞分析术观察转染细胞的生长和细胞周期变化.结果:NOEY2真核表达载体pcDNA3/NOEY2-CR构建成功.被稳定转染该载体的MDA-MB-231细胞有明确NOEY2蛋白表达,而对照细胞无表达.NOEY2转染细胞的生长抑制率可达46.3%,在细胞周期改变上可见明显的S期分数和G2/M期分数下降,而G0/G1期比例上升.结论:NOEY2基因转染对体外培养的人乳腺癌细胞生长具有一定的抑制作用,支持其作为一个抑癌基因的推测,本研究为进一步探索NOEY2作为治疗基因的价值创造了条件.
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