DNA甲基转移酶3B4过表达对293A细胞增殖影响及其机制的探讨

Effect of overexpression of DNA methyltransferase 3B4 gene on proliferation of 293A cells

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摘要背景与目的：DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)3B有近40种异构体，它们的表达有组织和疾病的特异性，细胞中这些异构体的功能尚不清楚。本研究旨在探讨外源性DNMT3B4基因过表达对人胚肾细胞株293A增殖的影响及其机制。方法：将携带DNMT3B4基因的质粒pCMV-DNMT3B4及空质粒pCMV-2B转染293A细胞(293A-vector)并形成稳定表达细胞系，培养300 d后用MTT法检测细胞的增殖；流式细胞仪检测细胞的周期分布；real-time PCR蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中p21表达情况；甲基化特异PCR(MS-PCR)检测p21基因启动子区甲基化状态。结果：在接种于96孔板的第4天，2株过表达DNMT3B4的293A细胞(293A-DNMT3B4-1和293A-DNMT3B4-2)吸光度(A)值分别是293A-vector细胞的(58.92±3.47)%和(68.82±5.64)%，过表达DNMT3B4抑制细胞增殖，差异有统计学意义(P<0.05)；293A-DNMT3B4-1和293A-DNMT3B4-2的S期细胞比例分别为(35.88±2.00)%和(37.00±1.79)%，293A-vector细胞比例为(40.44±0.91)%，过表达DNMT3B4降低S期细胞比例，差异有统计学意义(P<0.05)。过表达DNMT3B4增加p21的表达，但不改变p21基因启动子区甲基化状态。结论：DNMT3B4基因过表达可抑制293A细胞增殖并增加p21表达。