换一批柯萨奇B组病毒的RACE扩增与序列分析
Amplification of 3' cDNA end of coxsackievirus B by RACE and its sequence analysis
摘要目的探讨3′RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术检测柯萨奇B组病毒(CVB)的可行性,并建立相应的实验检测方法.方法首先自行设计柯萨奇B组病毒6个型别病毒基因组的一条通用引物spl;然后从柯萨奇病毒(CVB1～CVB6)感染的Hela细胞,提取总RNA,用引物sp1结合Oligo dT进行3′RACE扩增,将产物克隆到pGEM-T载体上,挑取阳性菌落进行序列测定,与标准株进行同源性比对.结果获得了柯萨奇B组病毒6个型别的3′末端扩增产物及其核苷酸序列,同源性分析的结果显示扩增毒株与标准株之间的核苷酸同源性在95%～99%之间,氨基酸同源性在98%～100%之间.结论设计的引物"sp1"是柯萨奇B组病毒6个型别病毒基因组的一条通用引物;该引物结合Oligo dT进行的3′RACE扩增可用于柯萨奇B组病毒的检测.
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