换一批
换一批重组pcDNA3.1-BMP7真核表达载体的构建与鉴定
Construction of carrier of recombinant pcDNA3.1-BMP7 eukaryotic express and its identification
摘要目的研究将家兔骨形成蛋白-7(BMP7)的cDNA构建于pcDNA3.1,形成重组DNA pcDNA3.1-BMP7真核表达载体.方法将自建的pGEM-3Zf(-)-BMP7与pBluescript SK(M13-)用HindⅢ及KpnI双酶切,电泳回收BMP7及pBluescript SK(M13-)酶切片段,连接得重组载体pBlue-BMP7,DH5a转化,阳性克隆扩增及提取纯化,并用Not I和Kpn Ⅰ双酶切,PCR及序列分析鉴定.将载体pBlue-BMP7及pcDNA3.1用Not I及Kpn Ⅰ双酶切,电泳回收BMP7及pcDNA3.1酶切片段,连接得真核表达载体pcDNA3.1-BMP7,将该载体用DH5a转化,阳性克隆扩增及提取纯化.再一次用Not I和Kpn Ⅰ双酶切,PCR及序列分析鉴定.结果通过酶切、PCR及序列分析证明pcDNA3.1-BMP7真核表达载体的BMP7目的基因序列约为1.5kb,与报道的鼠、人BMP7全长序列一致,无突变.结论成功构建了pcDNA3.1-BMP7真核表达载体.
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主题词
基因(Genes)骨形态发生蛋白质类(Bone Morphogenetic Proteins)序列分析(Sequence Analysis)目的(Goals)电泳(Electrophoresis)
分类号
Q784
栏目名称
DOI
10.3760/cma.j.issn.1000-4955.2005.04.030
发布时间
2005-10-27
基金项目
中国科学院资助项目（c03030306）
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